為什么要驗證HCP抗體覆蓋率？

在對工藝中HCP（宿主細胞蛋白）的監(jiān)控和產(chǎn)品放行中，ELISA一直被用作HCP檢測的金標準。這主要是因為ELISA可以在mg/ml級別的產(chǎn)品蛋白中有效地檢測ng/ml級別的HCP殘留。并且ELISA的操作簡便，是經(jīng)典的免疫學檢測方法。但ELISA檢測HCP也有方法的局限性，比如不能從ELISA的結(jié)果中知道樣品中有哪些HCP，或者用于ELISA檢測的抗體與哪些HCP發(fā)生了免疫反應。因此，監(jiān)管部門要求在使用ELISA檢測過程中HCP殘留含量時，不僅要通過方法學驗證證明試劑盒的準確度，精密度，靈敏度等，而且還需要證明使用的HCP抗體有廣泛的反應性，即HCP抗體覆蓋率。

AAE是檢測HCP抗體覆蓋率的更有效方法

2014年，作為過程污染物殘留檢測產(chǎn)品領(lǐng)先開發(fā)商，Cygnus結(jié)合多年HCP抗體及試劑盒開發(fā)經(jīng)驗，推出了Affinity Antibody Extraction（AAE）方法驗證覆蓋率，突破了傳統(tǒng)2DWB方法驗證覆蓋率的局限性，更真實準確反應HCP抗體覆蓋率。AAE提取富集的樣品和未經(jīng)AAE提取的樣品分別經(jīng)過2D PAGE分離后使用銀染的方法對得到的點進行匹配、計數(shù)、計算覆蓋率。這種方法一經(jīng)上市后，廣泛得到生物制藥企業(yè)和監(jiān)控部門的認可。

AAE+MS更清晰地展示了工藝中HCP殘留情況，進一步對產(chǎn)品質(zhì)量安全做風險評估

現(xiàn)階段，常用的HCP抗體覆蓋率驗證的方法都存在其自身的局限性。AAE方法解決了傳統(tǒng)2DWB中的低靈敏度和低特異性的問題。而且，由于AAE可以在富集本身含量較低的HCP的同時，還可以大幅降低中間品和終產(chǎn)品中的藥物蛋白。這使對中間品和終產(chǎn)品中HCP與HCP抗體的反應情況的分析成為可能。盡管如此，AAE和銀染分析也不能具體得知樣品中具體有哪些種類的HCP，尤其是那些與人體有較高免疫原性和對藥物有較大影響的HCP。基于以上問題的考慮，Cygnus利用更精準的質(zhì)譜檢測方法與AAE相結(jié)合，推出了新一代的AAE和Mass Spectrum覆蓋率驗證服務。

AAE與Mass Spectrum可對上游和下游工藝中的樣品進行分析，覆蓋率的結(jié)果更高、更真實。更主要的是質(zhì)譜可以對樣品中是否存在潛在高風險的HCP做出鑒定并提供這些蛋白相關(guān)含量，分子量，等電點等信息。無論是藥物研發(fā)人員，還是監(jiān)管人員都可以對某個工藝中HCP殘留情況有清楚的了解，從而做出更好的判斷。

北京西美杰科技有限公司是美國Cygnus Technologies公司中國區(qū)總代理，負責銷售Cygnus全線產(chǎn)品以及覆蓋率驗證，專屬試劑盒定制等服務，并提供產(chǎn)品和服務售前和售后技術(shù)支持、服務樣品寄送、進度跟蹤、服務報告整理等一站式服務。如感興趣請撥打西美杰熱線電話：400-050-4006。