在生物制品的生產過程中，宿主細胞DNA可能會殘留其中，這將會導致致癌基因或其他風險的遺傳物質進入到最終的藥物制劑中。為了降低這種風險，監管機構規定了允許殘留的HCD限度，根據所使用的細胞系及給藥方案的不同，允許的HCD殘留范圍在10~100pg/劑量之間。關于HCD殘留的檢測，《中國藥典2025》通則3407中列出了三種方法，分別是DNA探針雜交法、熒光染色法，以及定量PCR法。而USP General Chapter <509>“Residual DNA Testing”章節中建議使用基于探針的DNA定量作為驗證方法，用于檢測在大腸桿菌（E. coli）或中國倉鼠卵巢（CHO）細胞系中生產的重組生物制品，以確保更好的靈敏度和準確性。在整個生產過程中，質控人員需要對DNA水平進行評估，這些樣本可能含有其他雜質和高濃度的藥物活性成分，因此必需一種可靠且靈敏的DNA定量方法。

2025版中國藥典新增多個單抗藥物的HCD檢測要求：注射用曲妥珠單抗、英夫利西單抗、阿達木單抗、貝伐珠單抗、利妥昔單抗等，以及部分疫苗類（如 Sabin 株脊髓灰質炎滅活疫<50pg每劑）均明確要求采用通則3407第三法（定量PCR法）進行檢測。同時新增 <人用抗體偶聯藥物制品總論>，抗體偶聯藥物（ADC）納入監管，明確規定需要對外源性雜質進行監控。

Cygnus Technologies新推出的AccuRes?系列DNA定量試劑盒，專為用CHO、人或E. coli 細胞系重組表達生產的生物制品中HCD殘留檢測而設計。高濃度樣品可通過最小程度的稀釋后進行檢測，從而有效降低檢測限（LOD）。

Cygnus AccuRes?系列HCD檢測試劑盒的優勢特點：

? 準確性—探針法qPCR保證了針對目標細胞系(如CHO, HEK,E. coli 等)HCD檢測的特異性，避免目標HCD的漏檢；

? 更好的精確度—CleanAmp® dNTPs與熱啟動Taq DNA聚合酶體系可有效降低PCR擴增過程中的非特異性啟動；

? 靈活性—兼容所有能檢測FAM熒光信號的qPCR設備，降低額外購置設備的成本

? All-in-one kit支持從樣品到qPCR的全過程—試劑盒中包含了DNA提取試劑（試管法或孔板法），AccuRes? PCR體系預混液，引物/探針預混液和DNA標準品

? 靈敏度—LOD為0.6 fg/μl。

Cygnus AccuRes?系列HCD檢測試劑盒操作流程

1. DNA提取

Cygnus的DNA提取方法采用了一種新型DNA carrier，能夠從痕量水平的殘留DNA中回收HCD，并在無蛋白質、鹽和洗滌劑污染的環境中進行DNA檢測和定量。這比其他提取方法提高了DNA檢測和擴增的可重復性和穩定性。

2. 擴增

Cygnus AccuRes? 系列試劑盒中采用高特異性引物/探針體系對目標HCD進行擴增。帶有FAM熒光標記的核酸探針在每一次PCR反應循環中被BHQ-1? 淬滅。先進的 CleanAmp® dNTPs與熱啟動Taq DNA聚合酶反應體系降低了非特異性擴增，進一步確保了qPCR擴增的特異性，靈敏度與穩定性，同時qPCR體系的配置可以在室溫條件下操作。

3. 定量

試劑盒標準品的ct值構建的標準曲線可將檢測結果計算為pg/10μl宿主細胞殘留DNA，進而可將HCD濃度換算為ng/mL, ng/mg或是ng/劑量。基于該方法，殘留DNA最低可定量的濃度為0.6 fg/μL。

Cygnus AccuRes?系列HCD檢測試劑盒測試數據

準確性與可重復性測試。由兩名操作員（A和B）分別在兩天內對已知DNA樣本進行兩次檢測，計算檢測結果的SD, CV和回收率%（見下表）。

完整的和不同程度降解的CHO DNA的提取與擴增效果對比。將完整的gDNA（Control）與分別用Alu1酶處理30min、1h、1.5h和2h后的DNA（Digested）凝膠電泳圖像。對照組和酶處理30min組樣品擴增的線性范圍基本一致（如下圖）。

存在外源DNA的情況下，CHO引物/探針仍具有廣泛的線性范圍和特異性。不同濃度的E. coli DNA不會影響CHO DNA的標準曲線（如下圖）。

過程樣品與藥物原液（DS）檢測結果對比。對比含有1 mg/mL陰離子交換或陽離子交換純化的蛋白樣品或藥物蛋白的CHO DNA回收率（見下表）。

Cygnus AccuRes?系列HCD檢測試劑盒訂購信息

即將上市：

Cygnus Technologies, LLC.為生物技術和生物制藥行業提供產品和分析方法，旨在加速研發階段和提高產品質量。Cygnus開發和生產的生物工藝殘留試劑盒，用于檢測超過50種不同表達系統的特異性雜質。Cygnus作為專注于生物技術應用免疫檢測的高靈敏度分析技術的專家，Cygnus的產品和服務已經被幾乎所有主要的生物制藥公司使用超過25年。

北京西美杰科技有限公司作為Cygnus在中國總代理，與國內眾多知名藥企，CRO/CMO企業建立了長久穩定的合作關系。多年來西美杰的產品及服務幫助許多企業加速R&D階段，提高藥物質量、純度和安全，加速優化研發工藝，減少產品上市時間，降低QC成本。如您對上述產品感興趣，歡迎致電西美杰客服熱線400-050-4006或者登陸網站www.gp82.cn了解更多信息。